抗 DIA 血型检测试剂
Diego 血型系统及抗 Dia 试剂简介
Diego 血型系统于 1955 年被发现，并以首位产生针对该血型系统抗原的患者命名。抗 Dia 和抗 Dib 与新生儿溶血病（HDN）的关联性较输血反应更高。由 Diego 抗体引发的 HDN 在东南亚和南美洲更为常见。抗 Dia 可导致中度至重度 HDN，已有相关病例报告。
原理
该试剂在抗球蛋白检测阶段，会使携带相应 Dia 抗原的红细胞发生间接凝集现象。通常无凝集表明相应 Dia 抗原缺失（详见限制条件）。
试剂
美德声提供的人抗 Dia 血型试剂由人血清稀释于含大分子增强剂和牛血清白蛋白的氯化钠溶液中制备而成。每种试剂均按最佳稀释比例供应，适用于所有推荐检测技术，无需进一步稀释或添加。批号参考和有效期见瓶签。
储存和稳定性
试剂瓶到货后应于 2 - 8°C 下储存。长时间在此温度范围外储存可能导致试剂活性加速丧失。该试剂已按 BS EN ISO 23640:2015 文件要求，完成 37°C 和 -25°C 下的运输稳定性研究。
样本采集和准备
血液样本可采集于含 EDTA、柠檬酸盐、CPDA 抗凝剂的试管中，或作为凝固样本。样本应尽快检测。若检测延迟，需于 2 - 8°C 下储存。有明显溶血或微生物污染的样本不得用于检测。显示裂解迹象的血液样本可能导致结果不可靠。检测前用 PBS 或等渗盐水洗涤所有血液样本更佳，但非必需。
质量控制与建议
1. 建议每批检测同时进行阳性对照（最好是杂合子细胞）和阴性对照。若对照结果不符合预期，则检测结果无效。
2. 抗球蛋白技术只有在所有阴性检测结果与 IgG 致敏红细胞反应呈阳性时才有效。
3. 试剂中含大分子增强剂，可能与 IgG 致敏细胞产生假阳性反应，建议用患者血浆测试患者细胞以检测假阳性反应。
4. 在管技术中，使用瓶装滴管时，一体积约为 50µl。
5. 试剂的使用和结果解读必须由经过适当培训和资质的人员，按照试剂使用国家的要求进行。
所需材料
• 抗人球蛋白
• Bio-Rad ID 卡（LISS/Coombs 或抗 IgG）
• Bio-Rad ID 离心机
• Bio-Rad ID-CellStab
• Bio-Rad ID 孵箱，温度设定为 37°C ± 2°C
• 玻璃试管（10 x 75 mm 或 12 x 75 mm）
• IgG 致敏红细胞
• Ortho BioVue 系统设备（AHG 多特异性或抗 IgG）
• Ortho BioVue 系统离心机
• Ortho BioVue 系统加热块，温度设定为 37°C ± 2°C
• Ortho 0.8% 红细胞稀释液
• PBS 溶液（pH 6.8–7.2）或等渗盐水溶液（pH 6.5–7.5）
• 阳性（最好是杂合子）和阴性对照红细胞
• 量筒移液管
• 水浴或干式加热孵箱，温度设定为 37°C ± 2°C
使用说明
间接抗球蛋白技术（IAT）
1. 用 PBS 或等渗盐水制备 2-3% 的红细胞悬浮液。
2. 在标记好的试管中加入一体积的 试剂和一体积的红细胞悬浮液。
3. 充分混合后，在 37°C 下孵育 15 分钟。
4. 用 PBS 或等渗盐水洗涤红细胞 4 次，注意每次洗涤后倾倒盐水并重新悬浮红细胞。最后一次洗涤后完全倾倒盐水。
5. 向每个干燥的红细胞按钮中加入两体积的抗人球蛋白或抗 IgG。
6. 充分混合后，将所有试管以 1000 rcf 的相对离心力或合适的替代时间和力离心 20 秒。
7. 轻轻重新悬浮红细胞按钮并宏观观察凝集情况。
8. 用 IgG 致敏红细胞确认所有阴性反应的有效性。
Bio-Rad-ID 微量分型技术
1. 在 ID-Cellstab 或 ID 稀释液 2 中制备 0.8% 的红细胞悬浮液。
2. 从 LISS/Coombs 或抗 IgG ID 卡中取下所需数量的微量管的铝箔。
3. 在适当的微量管中加入 50µl 的 0.8% 红细胞悬浮液和 25µl 的试剂。
4. 在 37°C 下孵育 ID 卡 15 分钟。
5. 在 Bio-Rad ID 离心机中离心 ID 卡。
6. 宏观观察凝集情况。
Ortho BioVue 分型技术
1. 在 0.8% Ortho 红细胞稀释液中制备 0.8% 的红细胞悬浮液。
2. 从 AHG 多特异性或抗 IgG 设备中取下所需数量的反应室的铝箔。
3. 在适当的反应室中加入 50µl 的红细胞悬浮液和 40µl 的试剂。
4. 在 37°C 下孵育盒 15 分钟。
5. 在 Ortho BioVue 系统离心机中离心盒。
6. 宏观观察凝集情况。
结果解读
1. 阳性：红细胞凝集为阳性结果，在检测程序的可接受限制内，表明红细胞上存在 Dia 抗原。
2. 阴性：红细胞无凝集为阴性结果，在检测程序的可接受限制内，表明红细胞上不存在 Dia 抗原。
抗 DIA 血型检测试剂